Multiplexed MRM Analysis and Absolute Quantitation of 25 Proteins Implicated in Coronary Artery Disease
心血管疾病(CVD)是北美人群死亡和严重疾病的首位病因。现有的生物标志物都是用于急性起病后的诊断,还没有单一标志物足以在CVD早期作出诊断或判断CVD风险。文献中报道的具有CVD早期诊断生物标志物潜力的蛋白已超过150种。我们采用多重多反应(multiple reaction monitoring,MRM)分析对人体血浆中的45种蛋白进行绝对定量,其中28种蛋白在以往被证实与CVD的起病或进展有关。这一针对45种蛋白的分析被用来在动脉粥样硬化患者的血样中发现CVD的候选生物标志物。
45种血浆蛋白的MRM分析方法的建立包括预测每一目标蛋白上化学性质稳定的目标多肽,合成同位素标记的多肽标准品,优化纳升液相色谱和三级四级杆质谱(mass spectrometry,MS)的参数。每一肽段代表人类基因组的一段独特序列。设定肽段所带电荷,采用纯品肽段校正离子片段的信号强度。
将得到的肽混合物掺入三组样本中(20个样本/组)。三组受试者分别为狭窄程度>50%的冠心病患者;狭窄<10%的非冠心病者;健康受试者。45种蛋白MRM分析显示有5种蛋白可以区分有和无动脉粥样硬化的患者,准确性为80%~90%。目前,我们又额外增加了50个CVD相关蛋白,进一步扩大多重MRM分析并完成绝对定量。全部分析结果将在包括225例患者的队列在统计学上确定与重度、亚临床或无CVD相关的生物标志物。